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TaKaRa LA Taq™
GC rich片段的扩增例
 
 
    模板DNA为GC Rich序列时，使用以往的Taq DNA Polymerase通常难以进行PCR扩增。TaKaRa LA Taq和TaKaRa Ex Taq同以往的Taq DNA Polymerase相比，扩增效率高，可对一般难以扩增的DNA片段进行PCR扩增。
 
    下面是GC含量为70%的DNA片段大小为3kbp的扩增例。
 
    图1对使用普通Taq DNA Polymerase和TaKaRa Ex Taq、TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2的PCR扩增进行了比较。结果显示普通Taq酶不能扩增的GC Rich DNA片段使用TaKaRa Ex Taq、TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2可进行良好的PCR扩增。
 
    GC Rich DNA片段进行PCR扩增时，以7-deaza-dGTP替代dGTP有时可获得良好的扩增结果。如果想提高扩增效率，将dGTP和7-deaza-dGTP（或dTTP）混合后再使用可获得更好的扩增结果（图2）。 根据扩增片段的种类可优化dGTP和7-deaza-dGTP（或dTTP）的混合比例，建议进行各种条件的研讨决定最佳混合比例。
 
    * Primer序列
      M3-30 (将M3 Primer延长的DNA序列)
         5'-CAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGT-3'
      RV-32 (将RV Primer延长的DNA序列)
         5'-GATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGAC-3'
 
Template： VIII-5-pUC118
  （大小为3kbp的GC Rich DNA片段用Hindd III酶切后插入到pUC118中）
扩增片段大?。?/span> 约 3 kbp
  （大小为3kbp的GC Rich DNA片段用Hindd III酶切后插入到pUC118中）
Template： VIII-5-pUC118
Primer： Custom long primer (30～32 mer)
  (各10 pmol/50 μl PCR)
dNTP Mixture： 以GTP替代7-deaza-dGTP
PCR条件： 94℃、1 min 30 cycles  
  68℃、5 min
                   (使用TaKaRa PCR Thermal Cycler 480)
 
 
        1% Agarose gel
        8 μl电泳
Lane 1： Taq 进行PCR扩增
Lane 2： TaKaRa Ex Taq
Lane 3： TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2
Lane M1： λ-Hind III digest  
Lane M2： λ-EcoT14 I digest  
  图1比较GC Rich DNA片段的PCR扩增
 
 
        1% Agarose gel
        10 μl电泳
Lane 1： dGTP：dITP = 3：1 使用TaKaRa LA PCR Kit Ver. 2进行PCR扩增
Lane 2： dGTP：7-deaza-dGTP = 3：1
Lane 3： 7-deaza-dGTP
Lane 4： dGTP：dITP = 3：1 使用TaKaRa Ex Taq 进行PCR扩增
Lane 5： dGTP：7-deaza-dGTP = 3：1
Lane 6： 7-deaza-dGTP
Lane M： pHY Marker  
  图2 dGTP和7-deaza-dGTP、dITP的混合比例与GC rich DNA扩增片段的比较