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亨廷顿氏病基因的扩增 |
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使用TaKaRa LA Taq(分别与GC Buffer和以往的LA PCR Buffer组合使用)、B公司的GC Kit,对廷顿氏病基因(HD基因IT15 CAG序列重复;片段大小262 bp/GC含量73%、358 bp/GC含量71.5%)进行了PCR扩增和比较。结果显示,使用以往的LA PCR Buffer及B公司的GC Kit均无扩增片段,而使用GC Buffer的TaKaRa LA Taq可检测出2个片段。 |
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■ PCR反应条件 |
使用TaKaRa LA Taq时 |
94℃ 1 min |
↓
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94℃ 30 sec. |
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30 cycles |
60℃ 30 sec. |
72℃ 1 min. |
↓
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72℃ 5 min |
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B公司GC Kit(按照说明书进行操作) |
94℃ 1 min |
↓
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94℃ 30 sec. |
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30 cycles |
68℃ 3 min. |
↓
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68℃ 3 min |
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■ 结果 |
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反应液加量 |
反应液加量 |
反应液加量 |
终浓度 |
1: |
TaKaRa LA Taq |
10×LA PCR Buffer |
100 ng |
2: |
2×GC Buffer I |
100 ng |
3: |
2×GC Buffer II |
100 ng |
4: |
B公司GC Kit |
同款试剂盒中附带的Buffer |
100 ng |
M: |
100 bp DNA Ladder Marker |
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(Takara Bio Inc.比较数据) |
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Thermal Cycler:TaKaRa PCR Thermal Cycler MP |
gel:3% NuSieve 3:1 Agarose gel |
上样量:8 μl/50 μl |
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