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使用SapphireAmp® 的菌落PCR
 
SapphireAmp® Fast PCR Master Mix（Code No. RR350A/B）
 
对转化了小鼠cDNA来源pUC118文库（插入了0.5 kb～5 kb的DNA片段）的大肠杆菌菌落，利用菌落PCR对插入片段进行确认。
 
1. 配制反应管数＋α的Master Mix，分装50 μl至PCR反应管。
例）进行8个检测样品的PCR反应
 
  1个反应   9个反应
SapphireAmp Fast PCR Master Mix（2×Premix） 25 μl   225 μl
M13 Primer M4（20 μM） 0.5 μl   4.5 μl
M13 Primer RV（20 μM） 0.5 μl   4.5 μl
灭菌水 24 μl   216 μl
 
2. 用灭菌枪头的尖端挑取少量大肠杆菌菌落，悬浮于1. 的PCR反应管中的反应液后进行PCR反应。
 
PCR反应条件
                                       94℃　1 min.
                                        ↓
98℃　5 sec.   30 cycles  
55℃　5 sec.  
72℃　40 sec.  
 
（PCR反应所需时间：1小时11分钟，使用TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice）
 
 
电泳结果
 
 
 
电泳结果可以确认到各种片段大?。?.5 kb～5 kb）的扩增产物。