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使用各公司PCR酶扩增亚硫酸氢盐处理后的DNA
 
【方法】
以亚硫酸氢盐处理后的HeLa基因组DNA为模板，使用TaKaRa EpiTaq HS及其他公司的PCR酶进行扩增。
（处理后的HeLa基因组DNA 100 ng/50 μl反应体系） 反应按以下条件进行。
 
亚硫酸氢盐处理：MethylEasy Xceed Rapid DNA Bisulphite Modification Kit（Code No. ME002）
目的基因：CDKN2A、BRCA1 gene 上游的CpG 岛区域
扩增大?。?44 bp (CDKN2A)、1,017 bp (BRCA1)
 
＜反应液组成＞
 
  使用量 终浓度
  亚硫酸氢盐处理HeLa 基因组DNA（50 ng/μl） 2 μl 100 ng/50 μl
  10 × EpiTaq PCR Buffer (Mg2+ free) 5 μl 1×
  25 mM MgCl2 5 μl 2.5 mM
  dNTP Mixture（各2.5 mM） 6 μl 0.3 mM
  Sense Primer（20 μM） 1 μl 0.4 μM
  Antisense Primer（20 μM） 1 μl 0.4 μM
  TaKaRa EpiTaq HS（5 U/μl） 0.25 μl 1.25 U/50 μl
  灭菌水 up to 50 μl  
 
 
＜PCR条件＞
98℃　10 sec.   40 cycles  
55℃　30 sec.  
72℃?。?0 sec.（144 bp）or 1 min.（1,017 bp）］  
 
（TaKaRa EpiTaq HS以外的其他试剂按各公司反应条件进行反应）
 
 
【结果】