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以亚硫酸氢盐修饰后的HeLa基因组DNA为模板进行PCR扩增反应的实验例
 
【方法】
1. 使用MethylEasy™ Xceed Rapid DNA Bisulphite Modification Kit（Code No.ME002）进行亚硫酸氢盐修饰，然后进行PCR扩增反应。
目的基因：CDH1、MLH1、BRCA1 gene上游的CpG岛区域。
扩增片段大?。?53 bp (CDH1 )、297 bp (CDH1 )、136 bp (MLH1 )、292 bp (MLH1 )、613 bp (BRCA1 )、1,017 bp (BRCA1 )。
 
2. 按下列组成配制PCR反应液。
试剂 使用量 终浓度
  亚硫酸氢盐修饰后的HeLa基因组DNA （50 ng/μl） 2 μl 100 ng/50 μl
  10 × EpiTaq PCR Buffer (Mg2+ free) 5 μl 1×
  25 mM MgCl2 5 μl 2.5 mM
  dNTP Mixture（各2.5 mM） 6 μl 0.3 mM
  Sense Primer（20 μM） 1 μl 0.4 μM
  Antisense Primer（20 μM） 1 μl 0.4 μM
  TaKaRa EpiTaq HS（5 U/μl） 0.25 μl 1.25 U/50 μl
  灭菌水 up to 50 μl  
 
 
3. PCR反应条件
98℃　10 sec.   30 cycles  
55℃　30 sec.  
72℃　30 sec. [30 sec./～500 bp、1 min./500 bp～]  
 
 
【结果】