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使用LA PCR用Genome DNA Set进行LA PCR反应 |
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利用LA PCR用Genome DNA Set,各DNA与相应的Primer set使用TaKaRa LA Taq进行了PCR扩增。 |
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反应液组成 |
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反应液量 |
终浓度 |
genome DNA |
1 μl |
Human genome:500 ng
E.coli genome:100 ng |
10 × LA PCR Buffer II (Mg2+plus) |
5 μl |
1× |
25 mM MgCl2 |
5 μl |
2.5 mM |
dNTP Mixture |
8 μl |
400 μM each |
Primer #1 |
1 μl |
0.2 μM |
Primer #2 |
1 μl |
0.2 μM |
TaKaRa LA Taq |
0.5 μl |
2.5 U/50 μl |
灭菌水 |
up to 50 μl |
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操作时的注意事项 |
· 试剂盒内的所有组份在室温~37℃下完全融解后,用移液枪充分吸打混合或上下颠倒混合。尽量不要使用振荡器。
混合10×LA PCR Buffer和TaKaRa LA Taq时,为了防止产生气泡或酶失活,要注意缓慢混合。此外,各组份使用前请置于冰上保存。
· PCR反应液在PCR反应前轻轻吸打混合,不能使用振荡器。 |
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PCR反应条件【使用TaKaRa PCR Thermal Cycler MP】 |
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94℃、1 min |
1 cycle |
98℃、10 sec
68℃、15 min |
30 cycles |
72℃、10 min |
1 cycle |
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